【细胞解读系列】关于A549,您一定要知道的那些事
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癌症研究是一个科学探究领域,一种特别难以治疗的癌症是肺癌。肺部肿瘤学是全球癌症相关死亡的主要原因之一,研究人员一直在努力寻找诊断,治疗和预防这种疾病的新方法。肺癌是男性和女性癌症死亡的主要原因,该疾病的五年生存率低于20%。A549细胞系是一种广泛使用的人肺腺癌细胞系,来源于原发性肺肿瘤。A549细胞具有高度增殖性,现已被用于各种研究应用。
01
什么是A549细胞
A549细胞又称为肺癌人类肺泡基底上皮细胞,最早是在1972年由D.J.Giard等人通过一位58岁的白人男性的外植体肿瘤,转移并培养肺肿瘤组织而得到的。
在自然界中,这些细胞是鳞状的,它们可以通过肺泡扩散传播一些物质,如水和电解质。如果将A549细胞体外培养,它们会成长为单层细胞,附着或紧贴在培养瓶上。人肺泡上皮细胞株A549可以固定或悬挂在体外的溶液。
这些细胞的另一个特点是他们能够合成卵磷脂,并且含有高度不饱和的脂肪酸,这对于维持细胞膜磷脂有重要意义。


(A549细胞图册)
02
A549细胞的形态和特征
多年来,A549细胞已经得到了很好的表征,对于经常将它们用作体外和体内模型的研究人员来说很有价值。A549细胞是上皮细胞,在体外作为单层粘附生长,并作为合适的转染宿主。这也意味着它们是排列在器官和组织表面的细胞。A549腺癌细胞在营养丰富的DMEM培养基中的实验室中生长。当它们以这种方式生长时,它们形成单层细胞。A549细胞成为肺癌研究模型的黄金标准,现在常用于细胞培养研究,作为研究人类肺癌的模型。
03
A549细胞培养方案
1) 用0.05%-0.25%的胰蛋白酶与0.53 mm EDTA冲洗细胞;
2) 在T75烧瓶中,向烧瓶中加入2mL胰蛋白酶-EDTA,并在倒置显微镜下观察细胞层脱离。脱落应在3-10分钟内发生。在此过程中不要搅动细胞,因为搅动细胞的话会使细胞结团簇生。如果细胞没有脱落,则需在培养箱中放置5分钟以促进分散;
3) 通过添加胰蛋白酶-EDTA四倍体积的完全培养基,来中和胰蛋白酶,随后对细胞样品进行离心,去除上清液。
4) 加入6-8 mL生长培养基沉淀和吸出细胞,轻轻移除上清液;
5) 以适当的分离比例将细胞悬浮液等分试样加入培养容器中;
6) 在 5% CO 2 中于 37°C 下孵育,将培养物保持在 2 x 103和 1 x 104细胞/厘米2。对细胞进行计数,以确保浓度不超过7 x 104细胞/厘米2。
在整个细胞培养过程中,测量检测细胞浓度的工作尤为重要,牛顿光学CytoEasy全自动高通量细胞计数仪是一款基于图像法检测的细胞计数仪,具有优秀的光路系统与图像识别系统,能够有效的区分细胞碎片与杂质的干扰,得到非常稳定可靠的结果。


(CytoCubeAuto明场与台盼蓝模式下对A549细胞的圈出情况)
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