【细胞解读系列】关于A549，您一定要知道的那些事

牛顿光学

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       癌症研究是一个科学探究领域，一种特别难以治疗的癌症是肺癌。肺部肿瘤学是全球癌症相关死亡的主要原因之一，研究人员一直在努力寻找诊断，治疗和预防这种疾病的新方法。肺癌是男性和女性癌症死亡的主要原因，该疾病的五年生存率低于20%。A549细胞系是一种广泛使用的人肺腺癌细胞系，来源于原发性肺肿瘤。A549细胞具有高度增殖性，现已被用于各种研究应用。

       A549细胞又称为肺癌人类肺泡基底上皮细胞，最早是在1972年由D.J.Giard等人通过一位58岁的白人男性的外植体肿瘤，转移并培养肺肿瘤组织而得到的。

       在自然界中，这些细胞是鳞状的，它们可以通过肺泡扩散传播一些物质，如水和电解质。如果将A549细胞体外培养，它们会成长为单层细胞，附着或紧贴在培养瓶上。人肺泡上皮细胞株A549可以固定或悬挂在体外的溶液。

       这些细胞的另一个特点是他们能够合成卵磷脂，并且含有高度不饱和的脂肪酸，这对于维持细胞膜磷脂有重要意义。 

（A549细胞图册）

       多年来，A549细胞已经得到了很好的表征，对于经常将它们用作体外和体内模型的研究人员来说很有价值。A549细胞是上皮细胞，在体外作为单层粘附生长，并作为合适的转染宿主。这也意味着它们是排列在器官和组织表面的细胞。A549腺癌细胞在营养丰富的DMEM培养基中的实验室中生长。当它们以这种方式生长时，它们形成单层细胞。A549细胞成为肺癌研究模型的黄金标准，现在常用于细胞培养研究，作为研究人类肺癌的模型。

1） 用0.05%-0.25%的胰蛋白酶与0.53 mm EDTA冲洗细胞；

2） 在T75烧瓶中，向烧瓶中加入2mL胰蛋白酶-EDTA，并在倒置显微镜下观察细胞层脱离。脱落应在3-10分钟内发生。在此过程中不要搅动细胞，因为搅动细胞的话会使细胞结团簇生。如果细胞没有脱落，则需在培养箱中放置5分钟以促进分散；

3） 通过添加胰蛋白酶-EDTA四倍体积的完全培养基，来中和胰蛋白酶，随后对细胞样品进行离心，去除上清液。

4） 加入6-8 mL生长培养基沉淀和吸出细胞，轻轻移除上清液；

5） 以适当的分离比例将细胞悬浮液等分试样加入培养容器中；

6） 在 5% CO ₂ 中于 37°C 下孵育，将培养物保持在 2 x 10³和 1 x 10⁴细胞/厘米²。对细胞进行计数，以确保浓度不超过7 x 10⁴细胞/厘米²。

       在整个细胞培养过程中，测量检测细胞浓度的工作尤为重要，牛顿光学CytoEasy全自动高通量细胞计数仪是一款基于图像法检测的细胞计数仪，具有优秀的光路系统与图像识别系统，能够有效的区分细胞碎片与杂质的干扰，得到非常稳定可靠的结果。

(CytoCube^Auto明场与台盼蓝模式下对A549细胞的圈出情况)

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