人工计数的注意事项你Get到了吗?

2022-09-20 14:26:16

牛顿光学

智能成像,一步到位!


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       细胞计数是许多细胞实验中的一个重要步骤,用来确定样品中的细胞数量和存活率。通常情况下,计数的目的是为了知道如何稀释未知细胞浓度的样品,来进行下一步实验。实验室中最常用的细胞计数工具是血球计数板。那么我们在使用血球计数板对细胞进行计数时应该注意哪些情况呢?


01

镜检

       在准备对细胞样品计数时,首先要确保样品表面必须是干净的。任何污染都会导致计数结果的不准确,所以在计数前,我们应当先用75%乙醇对血球计数板与玻璃盖玻片进行清洗,再用无尘布擦干表面。将清洗完的血球计数板放在显微镜下进行镜检,若还是发现有杂质则需要重新进行清洗,直至在显微镜下观察到计数板上无杂质即可。


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02

加样

       在加样前应当对样品中的细胞立即进行混匀处理,是确保被分析样品具有代表性的重要步骤。一般是轻轻摇晃细胞样品;然后再配合移液枪吹打细胞样品。这样会使细胞分散的更加均匀,减少细胞聚团现象


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03

入镜计数

       当镜检和打散细胞的准备工作完成后,就可以使用移液枪轻轻将细胞样品打入血球计数板中。随后再将细胞计数板放在显微镜的载物台中,用显微镜观察细胞。


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04

计数方法

       在显微镜下观察细胞,如果每个大方格内少于5个细胞的话,就需将样品重新离心,用更小的体积重悬细胞;若细胞有相互重叠或因密度太大难以区分时,则需要再次稀释样品到更大的体积。一般为每个大方格存在20-50个细胞即可。为了较快而准确的计数,计数时一般选择“S”型计数路径和“记上不记下,记左不记右”的原则进行计数

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05

器材维护

       每次使用完细胞计数板后都应该再次使用酒精进行清洗,用无尘布擦干后存放起来即可,显微镜也需要用防尘罩盖住,以免灰尘落进镜筒内。


       使用传统人工计数的方法来对细胞进行计数是一个费时费力的工作,而且通常数据也会因为一些操作的失误引起较大的误差,而一台优秀的细胞计数仪可以完全避免人工失误造成的误差,大大提高数据的准确性。还可以节省实验人员大部分的时间


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